Cách điện di kiểm tra DNA trên gel agarose - Tác giả : phamnhan

Giáo dục - Giáo Dục Bậc Cao

Giới thiệu chung:

Trong các nghiên cứu sinh học phân tử, có rất nhiều cách để có thể làm hiện hình ADN hay ARN trong đó: điện di kiểm tra DNA trên gel agarose là một biện pháp cổ điển nhưng mang lại hiệu quả cao và được dùng phổ biển nhất. trong bài viết này, Tôi xin giới thiệu với các bạn các bước tiến hành điện di kiểm tra DNA trên gel agarose.

Các bước:

Bước 1

Chuẩn bị agarose gel

Cho 1% type-II-agarose vào 100 mL đệm 0,5× TAE (nếu khuôn đổ gel lớn thì tăng theo tỷ lệ trên).

Đun trong nồi khử trùng hoặc lò vi sóng cho đến khi agarose tan hoàn toàn. Nếu quá trình đun mất nước quá nhiều thì phải thêm nước cho đủ 100 mL. Để nguội khoảng 60oC và đổ vào buồng điện di có cài sẵn lược. Chiều dày gel khoảng 5 mm là thích hợp. Sau 30-40 phút, khi gel đã đông cứng, có thể gỡ lược ra.

Bước 2

Đặt mẫu DNA vào giếng

Dùng micropipette hút 11 mL dung dịch trên cho vào giếng. Lưu ý mẫu chạy điện di phải có dung tích £ thể tích của giếng. ường đặt mẫu sau khi đã đổ dịch đệm 0,5× TAE vào buồng điện di cho ngập gel, ít khi đặt mẫu trước rồi đổ đệm sau (nạp khô). Để dễ làm việc nên dùng micropipette loại 20-200 mL và đặt buồng điện di trên bàn có nền đen. Khi tăng điện áp của quá trình điện di, các đoạn DNA lớn thường dịch chuyển nhanh hơn so với các đoạn nhỏ. Tuy nhiên, để có độ phân giải (resolution) tốt nhất đối với các đoạn DNA ước lớn hơn 2 kb thì điện áp được sử dụng phải nhỏ hơn 5 V/cm (giá trị cm được tính theo khoảng cách giữa hai điện cực chứ không phải là chiều dài của gel). DNA dịch chuyển từ cực âm đến cực dương. Quan sát sự dịch chuyển bằng màu bromophenol để biết lúc nào cần ngừng điện di

Tùy thu

ộc vào từng mục đích điện di khác nhau có thể sử dụng nồng độ DNA cao hoặc thấp.

Bước 3

Quan sát và chụp ảnh

 

Không nhìn vào ánh sáng t

ử ngoại nếu không có kính lọc thích hợp.

Chú ý

Bản gel sau khi nhuộm EtBr được quan sát dưới ánh sáng tử ngoại (l = 302 nm).  Dùng thiết bị chuyên dụng để phân tích và lưu trữ hình ảnh DNA (Gel Documentation System).

Bài viết liên quan: